全基因组范围基因敲除gRNA文库（GeCKO v2.0）
银河galaxy提供专利引进于Broad研究所张峰实验室的，能实现Human和Mouse细胞基因组范围CRISPR敲除的gRNA文库（GeCKO ），能够在Human或Mouse细胞中快速产生功能缺失的突变体并且筛选所期望的表型。运用GeCKO文库可以在人或小鼠的基因组内敲除任何表达基因及miRNA等非表达的基因。GeCKO文库允许客户在不同的条件下鉴定任何细胞功能必须的基因，筛选何种基因的缺失会使癌细胞具有耐药性。GeCKO文库已经被广泛使用于原代的人或小鼠细胞，干细胞，癌细胞及各种稳定细胞系。GeCKO v2.0作为升级版的GeCKO文库，加入非靶向gRNA作为对照，同时用于转导的慢病毒载体也同步进行了升级，以便更高效的富集病毒和提升病毒在原代细胞的转染效率。
GeCKO v2.0文库针对每个基因设计了6条gRNA序列，但为了降低后续转染和筛选工作量的压力将GeCKO v2.0文库分成两个文库，文库A和文库B。每个文库包含针对每个基因的3个gRNA，以及1,000个非靶向的对照性gRNA。A文库还包含针对miRNA的gRNA（每个miRNA有4个gRNA）。为了确保针对每个基因的gRNA的完整表达，可以同时购买A文库和B文库混合后使用；但如果细胞样品和后续高通量筛能力有限，建议可以仅使用文库A进行筛选。
更多GeCKO文库设计、构建信息，请参考张峰实验室发表的文献：Sanjana N.E.，Shalem O.，Zhang F. Improved vectors and genome-wide libraries for CRISPR screening. Nat Methods. 2014 Aug；11(8)：783-4. doi：10.1038/nmeth.3047.
文库信息
| 文库 |
序列信息 |
| Human Library A |
65,383 sequences：
-
靶向19,050个基因，每3条gRNA靶向1个基因；
-
1,864个miRNA，每4条gRNA靶向1个miRNA；
-
1000条对照（非靶向性）gRNA。
|
| Human Library B |
58,028 sequences：
-
靶向19,050个基因，每3条gRNA靶向1个基因；
-
1000条对照（非靶向性）gRNA。
|
| Mouse Library A |
67,405 sequences：
-
靶向20,611个基因，每3条gRNA靶向1个基因；
-
1,175个miRNA，每4条gRNA靶向1个miRNA；
-
1000条对照（非靶向性）gRNA。
|
| Mouse Library B |
62,804 sequences：
-
靶向20,611个基因，每3条gRNA靶向1个基因；
-
1000条对照（非靶向性）gRNA。
|
银河galaxyGeCKO v2.0文库交付形式和使用方法
GeCKO v2.0文库中每一个gRNA都被克隆进优化的慢病毒载体，与辅助细胞共转染293细胞后可形成高滴度的病毒，最终gRNA序列可在目的细胞中实现高效转录。
完成病毒包装的GeCKO v2.0文库应与目的细胞进行较低的MOI进行转染，以确保进入单个细胞的gRNA数量不超过1个。在完成转染后，开始筛选工作之前，应进行一轮NGS深度测序，评估细胞池中gRNA的表达情况。在筛选结束后再进行第二轮NGS深度测序，并对数据进行分析, 确定筛选过程中丢失或富集的gRNA序列。
GeCKO文库交付规格
-
文库（转染级）以25μg为一个单位量。100μg及200μg文库分别是以4x25μg或者8x25μg形式交付。
-
提供项目报告及二代测序验证的统计摘要及COA文件，如您需要，还可提供完整可用的NGS原始数据。
