非病毒细胞疗法-CRISPR基因敲入优化试剂盒

快至3个工作日! sgRNA + Cas蛋白 + 单链/双链敲入模板
节省75%经费! 验证与优化非病毒细胞疗法开发实验

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基于CRISPR技术的非病毒模式的细胞治疗开发凭借其成本低，通量高和更安全的特点，逐渐受到更多关注，也为细胞治疗商业化过程中，暴露出来的慢病毒载体短缺导致产能和推广受限问题，提供了解决方案。

银河galaxy推出“非病毒细胞疗法-CRISPR基因敲入优化试剂盒”，试剂盒包含sgRNA，Cas蛋白，单链/双链敲入模板，用于验证和优化T细胞，NK细胞，iPSC等细胞基因敲入效率，推进支持基于CRISPR技术敲入CAR，TCR等序列非病毒细胞治疗开发，具有以下优势：

高效的验证优化

含EGFP或GFP报告基团，快速优化实验体系、提升敲入效率

经济快速的测试

现货快至3个工作日，较之定制试剂节省75%经费

灵活的试剂组合

可选任意一个或多个组分

序列经优化与验证

每个批次产品均经过验证，敲入效率高达57%

CRISPR/Cas9基因编辑

试剂盒组分

化学合成sgRNA

HPLC纯化的SafeEdit sgRNA
TRAC、RAB11A敲入位点可选

高纯度Cas9蛋白

野生型（WTSpCas9）和增强型（eSpCas9）均可选择

基因敲入(HDR)模板

单链ssDNA/共价闭合双链dsDNA敲入模板可选
可添加CTS设计提升敲入效率

基因敲入增强剂（Enhancer）*

iPSC/T细胞等多种细胞，多个位点验证
显著提升敲入效率高达2.4倍

* 欢迎咨询基因敲入增强剂（Enhancer），您可以联系技术支持了解详情或订购，邮箱： oligo@genscript.com.cn ，电话：400-025-8686转5812或5815。

试剂盒定制

1. 请选择您需要的目的基因敲入位点:

TRAC : 适用于T细胞，常用的CAR序列敲入位点，sgRNA针对TRAC位点的第一个外显子区域设计
RAB11A : 通用的管家基因，适用于T细胞、NK细胞、巨噬细胞、iPSC细胞等具有RAB11A 位点的更广泛的细胞
备注 :其他位点请选择定制化sgRNA 、基因敲入（HDR）模板合成服务

2. 请选择您需要的基因敲入模板：

野生型Cas9蛋白 : 科研级，包含一个核定位信号（NLS）
特异性增加型eSpCas9-2NLS蛋白 : 通过在SpCas9 (K848A/K1003A/R1060A) 两端增加核定位信号（NLS）去提升基因编辑的靶向特异性，更稳定，在提升编辑效率的同时可以降低10倍以上的脱靶效率¹

3. 请选择您需要的基因敲入模板：

GenExact™ ssDNA: 单链模板
GenWand™ dsDNA: 双端共价封闭双链模板
GenEaxct™ ssDNA和GenWand™ dsDNA： 推荐同时选择两者，比较选择合适您实验体系的敲入模板类型

4. 您是否需要在您的基因敲入模板上增加CTS序列去提升敲入效率？
(CTS设计提升编辑效率的方案详见文献报告和案例分享，实验操作详见操作指南)

需要：CTS序列让 RNP（Cas9+sgRNA）结合至敲入模板两端，促进模板进入细胞核，提升敲入效率，单链模板需要配合退火引物使用
不需要

确认提交

试剂盒产品详情

请查收您的定制化试剂盒，按照《银河galaxy的实验操作指南》的推荐试剂剂量，可以用于约12个反应的实验（Lonza 4D电转平台），或用于25个反应的实验（Neon电转平台），您可以根据您的实验体系和试剂用量增减产品数量，确保每个组分的交付量足够支持您开展实验。

货号	产品名称	数量
KIOK1-1.5	SafeEdit TRAC sgRNA - 1.5 nmol
KIOK1-3	SafeEdit TRAC sgRNA - 3 nmol
KIOK1-6	SafeEdit TRAC sgRNA - 6 nmol
KIOK2-1.5	SafeEdit RAB11A sgRNA - 1.5 nmol
KIOK2-3	SafeEdit RAB11A sgRNA - 3 nmol
KIOK2-6	SafeEdit RAB11A sgRNA - 6 nmol
KIOK3-100	Ultra eSpCas9 - 100 μg
KIOK3-200	Ultra eSpCas9 - 200 μg
KIOK3-400	Ultra eSpCas9 - 400 μg
KIOK4-100	Ultra WTSpCas9 - 100 μg
KIOK4-200	Ultra WTSpCas9 - 200 μg
KIOK4-400	Ultra WTSpCas9 - 400 μg
KIOK5	ssDNA_TRAC_EGFP - 50 μg
KIOK6	ssDNA_TRAC_EGFP_CTS - 50 μg
KIOK7	dsDNA_TRAC_EGFP - 50 μg
KIOK8	dsDNA_TRAC_EGFP_CTS - 50 μg
KIOK9	ssDNA_RAB11A_GFP - 50 μg
KIOK10	ssDNA_RAB11A_GFP_CTS - 50 μg
KIOK11	dsDNA_RAB11A_GFP - 50 μg
KIOK12	dsDNA_RAB11A_GFP_CTS - 50 μg
KIOK13	TRAC CTS Annealing Oligo - 2 nmol
KIOK14	RAB11A CTS Annealing Oligo - 2 nmol

备注：ssDNA选择含CTS模板必须配套使用对应位点的退火引物，dsDNA本身即为双链无需退火

您可以根据实际需求选择加购以下产品：

货号	产品名称	数量
KIOK3-100	Ultra eSpCas9 - 100 μg
KIOK3-200	Ultra eSpCas9 - 200 μg
KIOK3-400	Ultra eSpCas9 - 400 μg
KIOK4-100	Ultra WTSpCas9 - 100 μg
KIOK4-200	Ultra WTSpCas9 - 200 μg
KIOK4-400	Ultra WTSpCas9 - 400 μg

参考文献

1. Slaymaker, et al. Rationally engineered Cas9 nucleases with improved specificity. Science 351, 84–88 (2016).

2. Shy, et al. Hybrid ssDNA repair templates enable high yield genome engineering in primary cells for disease modeling and cell therapy manufacturing. bioRxiv 2021.09.02.458799.

技术资源

基因敲入优化试剂盒实验操作指南

基因敲入实验步骤与试剂比例
CTS序列实验操作步骤
Enhancer使用步骤

免费下载免费下载

《UCSF基因编辑应用于细胞治疗实例材料》

含CTS序列敲入模板如何提升基因编辑效率？

免费下载免费下载

常见问题

如何选择合适的基因敲入（HDR）模板？
GenExact™ ssDNA
精准敲入、毒性更低的单链模板

应用

细胞治疗、KI细胞系/动物模型构建

优势

细胞毒性低，特别适合T细胞编辑

精准敲入，脱靶效应低

纯度高、经测序验证

规格

敲入序列长度：150-5,000nt

µg to mg级交付量

科研至GMP级别

立即订购
GenWand™ dsDNA
支持长片段敲入的双链模板

应用

长基因敲入、工艺放大/规模量产

优势

两端共价封闭、可实现高效精准敲入

适合长基因敲入、大规格更经济

纯度高、经测序验证

规格

敲入序列长度：2-10kb

µg to g级交付量

科研至GMP级别

立即订购
GenCircle™ dsDNA
无抗性基因的小型环状模板

应用

替代传统质粒HDR模板，匹配申报合规性

特点

较之传统质粒HDR模板，敲入效率提升高达30%

骨架仅429bp，毒性低，转染效率高

删除抗性标记与细菌源序列，规避耐药风险与合规性相关风险

纯度高、经测序验证

规格

敲入序列长度：1-50kb

µg to g级交付量

GMP级别规划中

立即订购
CTS设计如何提升基因敲入序列？

UCSF Marson Lab 开发了一种含CTS设计的敲入模板，在两端添加了Cas9蛋白靶向序列（CTS），两端序列中互补的序列通过退火形成了双链DNA。整个HDR模板中，待插入基因左右两侧为同源臂序列，同源臂序列外端为CTS序列，CTS包含PAM序列、gRNA序列和一段边缘核苷酸序列。

通过这种设计，CTS可以让RNP（Cas9+sgRNA）与敲入模板整合在一起进行电转，促进其进入宿主细胞的细胞核，这种设计可以让基因敲入模板更接近RNP的切割位点，从而提升目标基因插入效率。通过添加CTS设计，GMP适用规模的GenExact™ ssDNA 在未添加增强剂的条件下，敲入效率可高达46.2%（图3）。