环状RNA合成服务

定制化环状RNA合成，现货eGFP/Fluc环状RNA产品
快至3周！更稳定，蛋白表达量更高，免疫原性更低

新型的功能性mRNA分子

银河galaxy基于自研技术与工艺，推出定制化环状RNA（Circular RNA）合成服务，可支持含100 bp至4 kb目标序列的环状RNA合成，快至3周交付！同时，银河galaxy具备从基因合成，环状RNA制备，LNP包封的一站式服务，为您的项目推进降本加速。

环状RNA是一种单链的mRNA分子，5端和3端链接形成了共价闭环，其环状的结构带来了mRNA分子更稳定、mRNA持续表达蛋白时间更长、免疫原性低等许多功能上的优势，具备应用于疫苗、蛋白替代疗法、体内CAR-T疗法、抗体药物等领域的潜力。

IVT mRNA合成服务

银河galaxy环状RNA的优势

一站式服务，交付快

涵盖基因合成、质粒制备、
环状RNA制备、LNP包封

环化效率高，纯度高

自研的环状RNA载体、
环化技术与纯化方式

提升蛋白表达量

较之线性mRNA更稳定，
持续表达时间更长

免疫原性更低

无需加帽、加尾等修饰，
对细胞因子水平影响小

服务流程

服务详情

服务名称	长度	交付量	纯化方式	QC	交付形式	周期
定制化环状RNA合成	目标序列：100 bp - 4 kb 全长序列：＜5 kb	100 μg – 20 mg	HPLC	研究级 - 标准研究级 - 升级	1mM 柠檬酸钠缓冲液, pH6.5（默认） RNase-Free Water（可选）	3周起
环状RNA现货（eGFP / F-Luc）	eGFP环状RNA: 1,644nt F-Luc环状RNA: 2,577nt	25 / 50 / 100 / 200 μg	HPLC	研究级 - 标准	1mM 柠檬酸钠缓冲液, pH6.5（默认） RNase-Free Water（可选）	5个工作日

* IRES：默认 CVB3 或客户提供定制化IRES序列

下单流程

告知我们您的ORF或IRES序列

银河galaxy将为您的环状RNA设计包含T7启动子, PIE, IRES和ORF

基因合成至质粒制备

一站式完成环状RNA制备的全部前置步骤

环状IVT mRNA制备（RUO级别）

μg至mg级别，采用反相高效液相色谱的等纯化方式，并进行QC

QC详情

QC	项目	检测方式	检测标准
鉴定	外观	视觉观测	澄清无异物
	RNA长度	Bioanalyzer	条带位置匹配对应长度
	鉴定	RNaseR降解测试	不会被RNaseR降解
	RNA含量	UV吸收	目标值 ± 5%
	PH	PH试纸/PH计	目标值 ± 0.5
	缓冲液规格	按客户提供详情	-
纯度	A260/280	UV检测	1.70 ~ 2.30
纯度	HPLC检测	HPLC	≥80%
杂质	蛋白质残留	Nano Orange染料检测	≤ 1%
杂质	质粒DNA残留	qPCR	≤ 0.1%
安全性	内毒素	半定量	< 10EU/mg
	内毒素	定量	< 10EU/mg
	生物负载	直接接种	72小时内不生长

案例分享

环状RNA较之线性mRNA，稳定性高、降解慢、蛋白表达量高
通过RT-PCR检测mRNA拷贝数

通过荧光强度检测mRNA蛋白表达量

实验方法：

将编码GFP的环状RNA（无修饰）和线性mRNA（100% N1-me-pseU修饰）以同等的mol剂量转染A549细胞，用qPCR检测编码mRNA的丰度，用流式细胞术检测GFP蛋白的荧光强度。

实验结论：72小时后
- 环状RNA的拷贝数是线性mRNA的4倍，稳定性好，降解慢
- 环状RNA的蛋白表达量是线性mRNA的3倍，表达时间长，表达量高
银河galaxy环状RNA较之常规环状RNA，蛋白表达量更高

实验方法：

比较线性mRNA，常规环状RNA*，银河galaxy环状RNA（自研技术）三种编码eGFP的mRNA，转染A549细胞后蛋白表达量。

* Wesselhoeft, R.A., Kowalski, P.S. & Anderson, D.G. Engineering circular RNA for potent and stable translation in eukaryotic cells. Nat Commun 9, 2629 (2018)

实验结果：

银河galaxy环状RNA在开始的蛋白表达量和积累的蛋白表达量上，都有更高的表达水平。
银河galaxy环状RNA在多个细胞模型上蛋白表达量更高

实验方法：

比较常规环状RNA*，银河galaxy环状RNA（自研技术）两种编码eGFP的mRNA，转染A549细胞和HEK293T细胞后，通过流式细胞术检测蛋白表达量。

* Wesselhoeft, R.A., Kowalski, P.S. & Anderson, D.G. Engineering circular RNA for potent and stable translation in eukaryotic cells. Nat Commun 9, 2629 (2018)

实验结果：

基于自研技术的银河galaxy环状RNA，在经过HPLC纯化后，在两个细胞上的蛋白表达量均高于常规环状RNA 2-4倍。
环状RNA较之线性mRNA，免疫原性更低

实验方法：

将不同mRNA转染A549细胞(InvivoGen)，IL6水平检测：Abcam Human IL-6 ELISA Kit，IFN-α水平检测：QUANTI-Luc/Gaussia kit，NF-Kb水平检测：QUANTI-Blue kit。

实验结果：

较之线性mRNA，环状RNA引起的细胞因子上升幅度更低，免疫原性更低。

常见问题

环状RNA是什么？有什么优势？
环状RNA是一种单链的mRNA分子，5端和3端链接形成了共价闭环，不易受RNA外切酶影响，表达更稳定，不易降解。环状RNA被发现天然存在于哺乳动物细胞中，在很多生物学过程中扮演重要角色。

环状RNA自身优势为基于其开发的mRNA疗法带来的收益：
- 更稳定，表达量更高 → 降低给药频率
- 免疫原性更低 → 支持长期或多次给药
- 无需加帽加尾和核苷酸修饰 → 简化制备工艺
环状RNA应用领域有哪些方向？
现阶段环状RNA的应用：
- mRNA疗法开发：用于传染病或肿瘤疫苗、蛋白替代疗法、体内CAR-T疗法
- 生物标志物：环状RNA可以作为多种疾病的潜在生物标志物，例如肿瘤、心血管疾病、神经系统疾病等，可在血液、唾液、尿液等多种体液中检测到。
- 基因调控：环状RNA可以作为miRNA的分子海绵或于结合蛋白RBP相互作用，在转录或转录后水平上参与基因表达调控。
- 治疗靶点：环状RNA被作为是多种疾病的潜在治疗靶点，例如靶向特定的环状RNA可以改善疾病进展。
- 药物递送：基于环状RNA不易受RNA外切酶影响，更稳定的特点，可以尝试用于某些药物的递送。
综上，环状RNA的研究正在各个领域快速发展，从而为提升人类健康的医疗应用提供更多新思路。